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中藥材鑒別之川貝母

媒體:神農(nóng)采電商平臺(tái)  作者:內(nèi)詳   專業(yè)號(hào):川貝母 2024-05-23 10:20:59

 

本品為百合科植物川貝母Fritillaria cirrhosa D. Don、暗紫貝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia、甘肅貝母Fritillaria przewalskii Maxim.、梭砂貝母Fritillaria delavayi Franch.、太白貝母Fritillaria taipaiensis P.Y.Li或瓦布貝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsiavar wabuensis(S.Y.Tang et S.C.Yue)Z.D.Liu,S.Wang et S.C.Chen的干燥鱗莖。按性狀不同分別習(xí)稱“松貝”、“青貝”、“爐貝”和“栽培品”。夏、秋二季或積雪融化后采挖,除去須根、粗皮及泥沙,曬干或低溫干燥。

性狀

 

 

松貝  呈類圓錐形或近球形,高0.3~0.8cm,直徑0.3~0.9cm。表面類白色。外層鱗葉2瓣,大小懸殊,大瓣緊抱小瓣,未抱部分呈新月形,習(xí)稱“懷中抱月”;頂部閉合,內(nèi)有類圓柱形、頂端稍尖的心芽和小鱗葉1~2枚;先端鈍圓或稍尖,底部平,微凹入,中心有1灰褐色的鱗莖盤(pán),偶有殘存須根。質(zhì)硬而脆,斷面白色,富粉性。氣微,味微苦。

青貝  呈類扁球形,高0.4~1.4cm,直徑0.4~1.6cm。外層鱗葉2瓣,大小相近,相對(duì)抱合,頂部開(kāi)裂,內(nèi)有心芽和小鱗葉2~3枚及細(xì)圓柱形的殘莖。

爐貝  呈長(zhǎng)圓錐形,高0.7~2.5cm,直徑0.5~2.5cm。表面類白色或淺棕黃色,有的具棕色斑點(diǎn)。外層鱗葉2瓣,大小相近,頂部開(kāi)裂而略尖,基部稍尖或較鈍。

栽培品呈類扁球形或短圓柱形,高0.5~2cm,直徑1~2.5cm。表面類白色或淺棕黃色,稍粗糙,有的具淺黃色斑點(diǎn)。外層鱗葉2瓣,大小相近,頂部多開(kāi)裂而較平。

 

鑒別

 

(1)本品粉末類白色或淺黃色。

松貝、青貝及栽培品  淀粉粒甚多,廣卵形、長(zhǎng)圓形或不規(guī)則圓形,有的邊緣不平整或略作分枝狀,直徑5~64μm,臍點(diǎn)短縫狀、點(diǎn)狀、人字狀或馬蹄狀,層紋隱約可見(jiàn)。表皮細(xì)胞類長(zhǎng)方形,垂周壁微波狀彎曲,偶見(jiàn)不定式氣孔,圓形或扁圓形。螺紋導(dǎo)管直徑5~26μm。

爐貝  淀粉粒廣卵形、貝殼形、腎形或橢圓形,直徑約至60μm,臍點(diǎn)人字狀、星狀或點(diǎn)狀,層紋明顯。螺紋導(dǎo)管和網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑可達(dá)64μm。

(2)取本品粉末10g,加濃氨試液10ml,密塞,浸泡1小時(shí),加二氯甲烷40ml,超聲處理1小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解,作為供試品溶液。另取貝母素乙對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn),吸取供試品溶液1~6μl對(duì)照品溶液2μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液-水(18:2:1:0.1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,依次噴以稀碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。

(3)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶長(zhǎng)度多態(tài)性方法。

模板DNA提取  取本品0.1g,依次用75%乙醇1ml、滅菌超純水1ml清洗,吸干表面水分,置乳缽中研磨成極細(xì)粉。取20mg,置1.5ml離心管中,用新型廣譜植物基因組DNA快速提取試劑盒提取DNA[加入緩沖液AP1 400μl和RNA酶溶液(10mg/ml)4μl,渦漩振蕩,65℃水浴加熱10分鐘,加入緩沖液AP2 130μl,充分混勻,冰浴冷卻5分鐘,離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘14000轉(zhuǎn))10分鐘;吸取上清液轉(zhuǎn)移入另一離心管中,加入1.5倍體積的緩沖液AP3/E,混勻,加到吸附柱上,離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘13000轉(zhuǎn))1分鐘,棄去過(guò)濾液,加入漂洗液700μl,離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn))30秒,棄去過(guò)濾液;

再加入漂洗液500μl,離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn))30秒,棄去過(guò)濾液;再離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘13000轉(zhuǎn))2分鐘,取出吸附柱,放入另一離心管中,加入50μl洗脫緩沖液,室溫放置3~5分鐘,離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn))1分鐘,將洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2分鐘,離心(轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn))1分鐘],取洗脫液,作為供試品溶液,置4℃冰箱中備用。另取川貝母對(duì)照藥材0.1g,同法制成對(duì)照藥材模板DNA溶液。

PCR-RFLP反應(yīng)  鑒別引物:5'CGTAACAAGGTTT-CCGTAGGTGAA3'和5'GCTACGTTCTTCATCGAT3'。PCR反應(yīng)體系:在200μl離心管中進(jìn)行,反應(yīng)總體積為30μl,反應(yīng)體系包括10×PCR緩沖液3μl,二氯化鎂(25mmol/L)2.4μl,dNTP(10mmol/L)0.6μl,鑒別引物(30μmol/L)各0.5μl,高保真Taq DAN聚合酶(5U/μl)0.2μl,模板lμl,無(wú)菌超純水21.8μl。將離心管置PCR儀,PCR反應(yīng)參數(shù):95℃預(yù)變性4分鐘,循環(huán)反應(yīng)30次(95℃30秒,55~58℃30秒,72℃30秒),72℃延伸5分鐘。取PCR反應(yīng)液,置500μl離心管中,進(jìn)行酶切反應(yīng),反應(yīng)總體積為20μl,反應(yīng)體系包括10×酶切緩沖液2μl,PCR反應(yīng)液6μl,Sma I(10U/μl)0.5μl,無(wú)菌超純水11.5μl,酶切反應(yīng)在30℃水浴反應(yīng)2小時(shí)。另取無(wú)菌超純水,同法上述PCR-RFLP反應(yīng)操作,作為空白對(duì)照。

電泳檢測(cè)  照瓊脂糖凝膠電泳法(通則0541),膠濃度為1.5%,膠中加入核酸凝膠染色劑GelRed;供試品與對(duì)照藥材酶切反應(yīng)溶液的上樣量分別為8μl,DNA分子量標(biāo)記上樣量為1μl(0.5μg/μl)。電泳結(jié)束后,取凝膠片在凝膠成像儀上或紫外透射儀上檢視。供試品凝膠電泳圖譜中,在與對(duì)照藥材凝膠電泳圖譜相應(yīng)的位置上,在100~250bp應(yīng)有兩條DNA條帶,空白對(duì)照無(wú)條帶。

 

檢查

 

水分  不得過(guò)15.0%(通則0832第二法)。

總灰分  不得過(guò)5.0%(通則2302)。

浸出物】 照醇溶性浸出物測(cè)定法(通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定,用稀乙醇作溶劑,不得少于9.0%。

含量測(cè)定】 對(duì)照品溶液的制備  取西貝母堿對(duì)照品適量,精密稱定,加三氯甲烷制成每1ml含0.2mg的溶液,即得。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備  精密量取對(duì)照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml,置25ml具塞試管中,分別補(bǔ)加三氯甲烷至10.0ml,精密加水5ml、再精密加0.05%溴甲酚綠緩沖液(取溴甲酚綠0.05g,用0.2mol/L氫氧化鈉溶液6ml使溶解,加磷酸二氫鉀1g,加水使溶解并稀釋至100ml,即得)2ml,密塞,劇烈振搖1分鐘,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,放置30分鐘。取三氯甲烷液,用干燥濾紙濾過(guò),取續(xù)濾液,以相應(yīng)的試劑為空白,照紫外-可見(jiàn)分光光度法(通則0401),在415nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

測(cè)定法  取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加濃氨試液3ml,浸潤(rùn)1小時(shí),加三氯甲烷-甲醇(4:1)混合溶液40ml,置80℃水浴加熱回流2小時(shí),放冷,濾過(guò),濾液置50ml量瓶中,用適量三氯甲烷-甲醇(4:1)混合溶液洗滌藥渣2~3次,洗液并入同一量瓶中,加三氯甲烷-甲醇(4:1)混合溶液至刻度,搖勻。精密量取2~5ml,置25ml具塞試管中,水浴上蒸干,精密加入三氯甲烷10ml使溶解,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法,自“精密加水5ml”起,依法測(cè)定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中西貝母堿的重量(mg),計(jì)算,即得。

 本品按干燥品計(jì)算,含總生物堿以西貝母堿(C27H43NO3)計(jì),不得少于0.050%。

其他

 

 

性味與歸經(jīng)】 苦、甘,微寒。歸肺、心經(jīng)。

功能與主治】 清熱潤(rùn)肺,化痰止咳,散結(jié)消癰。用于肺熱燥咳,干咳少痰,陰虛勞嗽,痰中帶血,瘰疬,乳癰,肺癰。

用法與用量】 3~10g;研粉沖服,一次1~2g。

注意】 不宜與川烏、制川烏、草烏、制草烏、附子同用。

貯藏】 置通風(fēng)干燥處,防蛀。

 

 

(內(nèi)容來(lái)源:《中國(guó)藥典2020年版》,圖片來(lái)源:神農(nóng)采電商平臺(tái)。由神農(nóng)采收集整理,僅供學(xué)習(xí)交流使用,如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除。神農(nóng)采電商平臺(tái)會(huì)持續(xù)關(guān)注中藥材行業(yè)的新政策、新發(fā)展,感謝您對(duì)神農(nóng)采的關(guān)注和支持!)

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